6 مرحله + نحوه ایجاد رگه چهارگانه برای جداسازی: 9 نکته مرحله 25
خط خطی چهارگانه تکنیکی است که معمولاً در میکروبیولوژی برای جداسازی کلنی های باکتریایی استفاده می شود. این شامل پخش یک نمونه رقیق شده از باکتری بر روی یک صفحه آگار در یک الگوی خاص، ایجاد چهار ربع مجزا است. این روش امکان جداسازی کلنیهای باکتریایی را فراهم میکند، که سپس میتوان آنها را بیشتر تجزیه و تحلیل کرد یا برای آزمایشهای مختلف استفاده کرد. در اینجا مراحل ایجاد خط ربع برای جداسازی، همراه با چند نکته اضافی وجود دارد:
مرحله 1: مواد را آماده کنید همه مواد لازم را برای رگهبندی ربع جمع آوری کنید، از جمله صفحات آگار استریل، یک حلقه یا سوزن تلقیح، یک کشت باکتریایی که قرار است رگه شود و یک انکوباتور در دمای مناسب تنظیم شود.
مرحله 2: روی صفحه آگار برچسب بزنید با استفاده از یک نشانگر یا یک سیستم برچسب زدن، روی پایین صفحه آگار با اطلاعات مربوطه مانند تاریخ، نوع باکتری و سایر جزئیات شناسایی برچسب بزنید.
مرحله 3: حلقه را با شعله استریل کنید حلقه تلقیح را روی شعله نگه دارید تا داغ شود. این حلقه را استریل می کند و هرگونه آلودگی احتمالی را از بین می برد.
مرحله 4: نمونه بگیرید با استفاده از یک حلقه یا سوزن استریل، نمونه کوچکی از باکتری را از کشت خود تهیه کنید. اطمینان حاصل کنید که در طول این مرحله به هیچ سطح یا آلودگی دیگری دست نزنید.
مرحله 5: ربع خطی 1 درب صفحه آگار را به اندازه ای بلند کنید که به یک ربع دسترسی داشته باشید. از یک لبه صفحه شروع کنید و به آرامی با استفاده از حلقه تلقیح در یک بخش از ربع به جلو و عقب خط بکشید. هر رگه را کمی با رگه قبلی همپوشانی کنید.
مرحله 6: دوباره حلقه را با شعله استریل کنید قبل از اینکه به ربع بعدی بروید، یک بار دیگر حلقه را با شعله استریل کنید تا مطمئن شوید که هیچ باکتری از ربع قبلی منتقل نشده است.
مرحله 7: چرخش و تکرار صفحه را 90 درجه بچرخانید و روند خط کشی را در ربع بعدی تکرار کنید. باز هم اطمینان حاصل کنید که هر رگه کمی با رگه قبلی همپوشانی دارد.
مرحله 8: برای ربع 3 و 4 تکرار کنید فرآیند خط کشی را برای دو ربع باقیمانده تکرار کنید و صفحه را 90 درجه بین هر ربع بچرخانید.
مرحله 9: بشقاب را جوجه کشی کنید هنگامی که هر چهار ربع رگه ای شد، درب صفحه آگار را ببندید و آن را در انکوباتور تنظیم شده در دمای مناسب برای رشد باکتری قرار دهید. بشقاب را برای یک دوره مناسب، معمولاً یک شبه، انکوبه کنید.
نکات اضافی:
- از تکنیکهای آسپتیک در تمام مراحل برای جلوگیری از آلودگی استفاده کنید.
- مطمئن شوید که حلقه یا سوزن شما به درستی قبل و بعد از هر ربع استریل شده است.
- از فشار دادن زیاد روی سطح آگار در حین رگه زدن برای جلوگیری از آسیب رساندن به محیط اجتناب کنید.
- دست ثابت خود را حفظ کنید و از حرکات صاف و کنترل شده در طول خط کشی استفاده کنید.
- اگر چندین بشقاب رگهای میزنید، برای جلوگیری از سردرگمی، روی هر بشقاب به طور مشخص برچسب بزنید.
- الگوی خطوط خود را برای اطمینان از جداسازی مناسب کلنی ها پیگیری کنید.
- برای نتایج مطلوب از صفحات آگار تازه استفاده کنید.
- بشقاب های استفاده نشده را به درستی ذخیره کنید تا استریل آنها حفظ شود.
- در صورت لزوم رقت نمونه باکتری خود را برای دستیابی به کلنی های جدا شده تنظیم کنید.
با پیروی از این مراحل و اجرای نکات ارائه شده، میتوانید به طور موثر رگهای را برای جداسازی در میکروبیولوژی تقسیم کنید.